Добавки Waters к подвижной фазе для определения характеристик пептидов

16.01.2020
Целесообразность введения добавок в подвижную фазу при анализе пептидов с помощью жидкостной хроматографии и масс-спектрометрии.

Сложность определения характеристик пептидов и белков может быть обусловлена различными факторами, в том числе адсорбция, различная гидрофобность и специфичность. Поэтому для облегчения ионизации и повышения уровня сигнала аналита при анализе пептидов с помощью жидкостной хроматографии (ЖХ) и масс-спектрометрии (МС) в подвижную фазу целесообразно вводить добавки.

Кроме того, эти добавки (то есть сильные кислоты или буферы) обычно используются в ЖХ для улучшения удерживаемости аналита и формы пиков. Однако для разделения посредством МС добавки для подвижной фазы должны обладать высокой чистотой, только так можно избежать их значительного вклада в уровень фона и гарантировать высокое качества результатов анализа.

Наиболее распространенной добавкой для анализа с помощью ЖХ является трифторуксусная кислота (TFA), для анализа посредством МС применяется муравьиная кислота. В дополнение к усилению сигнала аналита, добавки к подвижной фазе, такие как TFA, также используются в ЖХ для ингибирования нежелательных вторичных взаимодействий. Однако существует и другое забытое решение: дифторуксусная кислота (DFA). Каждый из доступных вариантов имеет свои преимущества для определенных методов, однако как узнать, при каких условиях выбор добавки может оказать негативное влияние на результат решаемой задачи? 

Трифторуксусная кислота (TFA)

TFA, как правило применяется в качестве сильной кислоты и благодаря ее высокой растворимости и разрешающей способности является предпочтительной добавкой для подвижной фазы в тех случаях, когда используется УФ-детектирование. И напротив при использовании TFA в сочетании с масс-спектрометрическим детектированием Вы получите совсем не впечатляющие результаты, поскольку депротонированный TFA образует ионные пары с интересующими пептидами или аналитами, снижая количество анализируемого вещества, попадающего на детектор. Это явление называется подавлением ионов. Кроме того, TFA известна тем, что загрязняет системы МС, и ее практически невозможно удалить. В итоге TFA отлично подходит для УФ-детектирования, но при этом является не очень хорошим решением для МС-детектирования. 

Муравьиная кислота (FA)

Муравьиная кислота наиболее часто применяется в качестве добавки для подвижной фазы при разделении посредством МС. Она превосходно подходит для методов ЖХ-МС с обращенной фазой, однако, может привести к ухудшению результатов анализа при УФ обнаружении. Например, даже при использовании FA высокой степени очистки, уровень базовой линии УФ обычно выше, чем при разделении с применением TFA, также наблюдается снижение симметрии и формы пика. Поэтому муравьиная кислота не подходит для УФ-детектирования, но является отличным вариантом для детектирования посредством МС. 

Дифторуксусная кислота (DFA)

Дифторуксусная кислота (DFA) является агентом для образования пары ионов, который обеспечивает баланс между формой оптического пика и желаемым МС-откликом при выполнении рабочих процессов по определению характеристик пептидов посредством ЖХ-УФ / МС. Будучи более слабой кислотой, чем TFA, DFA не подавляет ионы и не загрязняет МС-систему. Но DFA является более сильной кислотой по отношению к FA, и как следствие обеспечивает лучшее разделение пиков и улучшает симметрию УФ-детектирования. Данная кислота отлично подходит как для УФ-детектирования, так и для МС-детектирования.


Добавки для подвижных фаз IonHance 


Добавки для подвижных фаз IonHance, подходящие для МС-детектирования

 

Выводы

Когда дело доходит до анализа пептидов, Вы можете существенно улучшить производительность системы за счет применения добавок для подвижной фазы. Тем не менее, для правильного выбора добавки с учетом требований решаемой задачи, важно учесть метод (ЖХ, МС или оба), который Вы используете для анализа пептидов. TFA станет правильным выбором для исследователей, которые сосредоточенны исключительно на ЖХ-анализе. Те, кто работает исключительно с методами МС должны применять муравьиную кислоту. Оптимальной добавкой для подвижной фазы для ученых, которые работают с обоими методами является добавка DFA.

Вернуться обратно
ОПУБЛИКОВАТЬ В СОЦ.СЕТЯХ