Методы защиты колонок высокоэффективной жидкостной хроматографии

25.05.2018
Защита колонок от повреждений должна быть первоочередным источником повышения точности и повторяемости результатов испытаний.
Определение свойств исследуемых проб с применением средств и методов высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) является бесценным для многих отраслей промышленности, включая, среди прочего, испытания фармацевтических препаратов, продуктов питания, а также проб из объектов окружающей среды.

Во многих лабораториях ключевым элементом высокоэффективной жидкостной хроматографии является колонка, поэтому защита колонок от повреждений должна быть первоочередным источником повышения точности и повторяемости результатов испытаний. Соблюдение условий эксплуатации и защита колонок – факторы, которые обеспечивают точность, сходимость и надежность результатов анализа.

Повышение производительности колонки

Производительность колонок зависит от нескольких факторов, в том числе свойств образцов, наличия нерастворимых частиц, а также процедур очистки и обслуживания.

Во время выполнения анализа не всегда удается соблюдать благоприятные для продления срока службы колонок условия. Например, некоторые образцы требуют жестких условий в части уровня рН. Однако соответствующие методы защиты колонок и процедуры профилактического обслуживания могут продлить срок службы колонки и обеспечить должную эффективность ВЭЖХ.


Какие факторы влияют на срок службы колонок?

Наиболее частыми проблемами ВЭЖХ анализа являются малая скорость потока и повышенное противодавление в колонке. Любой из вышеприведенных факторов указывает на возможное снижение производительности колонки.

Возникновению данных проблем могут способствовать частицы нефильтрованных проб или подвижных фаз. По существу, все, что поступает в систему ВЭЖХ, является источником риска попадания твердых частиц в матрицу колонки, сокращая срок ее службы.  Также к повреждению связанной фазы колонки и соответственно к снижению ее эффективности могут привести наличие реакционноспособного материала в пробе, жесткие условия рН и избыточное давление. Еще одним источником повреждений является химическая несовместимость между растворителем и расходными материалами для подготовки проб.
 

рис 2.jpg


Как достичь надежности и достоверности результатов?

1. Подготовка пробы

Предварительная фильтрация или центрифугирование проб перед вводом в колонку помогут ограничить попадание частиц в систему.
В зависимости от типа пробы, ее количества и метода ввода для этого шага подходит шприцевой фильтр или бесшприцевая фильтровальная виала.
Еще одним способом защиты колонки является предварительная химическая обработка пробы. В данном случае может применяться множество различных методов. Потенциальная проблема данного подхода заключается в определении рационального баланса в расходах и времени на предварительную обработку и возможными преимуществами с точки зрения экономии.

2. Подвижная фаза

Подвижная фаза - еще один фактор, влияющий на производительность колонок.

Для удаления частиц и воздуха из подвижной фазы необходимо выполнять фильтрацию и дегазацию, что исключит попадание воздуха и частиц в колонку и ее повреждение. Фильтрация особенно важна, если подвижная фаза содержит буферные соли или модификаторы из растворенного твердого материала. Кроме того, может быть полезно рассмотреть совместимость образца с подвижной фазой, поскольку некоторые компоненты образца являются реакционноспособными с определенными растворителями ВЭЖХ. Например, альдегиды и кетоны реагируют с амино-подвижной фазой. Исключение вступающих в реакцию комбинаций растворителя и подвижной фазы позволяет защитить колонки от повреждений.

3. Проходные фильтры и защитные колонки

Для предотвращения попадания частиц в систему и колонку должны применяться фильтры и защитные колонки. В зависимости от решаемой задачи должны применяться одно либо оба средства защиты колонки.

Защитная колонка представляет собой короткую колонку, через которую до входа в главную колонку проходят проба и подвижная фаза, что помогает адсорбировать частицы и защитить колонку от повреждений.
Необходимость применения защитной колонки определяется конкретной задачей и может быть достаточно дорогостоящим вариантом защиты, требующим оценки затрат по отношению к преимуществам.

4. Техническое обслуживание

Еще одним способом продления срока службы колонки является ее регулярная очистка. Очистка колонки может быть выполнена посредством промывки колонки отличными от используемых в системе подвижными фазами (например, содержащими больше воды или органических веществ). При высоком противодавлении очистка колонки может быть выполнена путем длительной промывки в обратном направлении.

Хранение колонок в подходящем растворителе может продлить срок их службы. Для определения наилучшего растворителя для сохранения определенной колонки обратитесь к руководству по эксплуатации на данную колонку.

Для определения наиболее подходящего решения фильтрации проб Вы можете воспользоваться приложением для выбора фильтра Whatman от компании GE. Для обсуждения и решения любых проблем в части анализа методом высокоэффективной жидкостной хроматографии обращайтесь в службу поддержки группы биологических наук General Electric либо торговому представителю.

Вернуться обратно
ОПУБЛИКОВАТЬ В СОЦ.СЕТЯХ